破傷風類毒素IgG抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）

【產品名稱】

通用名稱：破傷風類毒素IgG抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法） 

【包裝規格】

96人份/盒

【預期用途】

本產品用于體外定性檢測人血清/血漿或全血樣本中的破傷風類毒素IgG抗體。

適用于檢測正?；蛞赘腥巳嚎蛊苽L類毒素IgG抗體水平是否達到完全保護滴度（0.1 IU/ml）以及接種含破傷風類毒素成分疫苗后抗破傷風類毒素IgG抗體水平是否達到免疫成功標準（0.1 IU/ml）。

破傷風桿菌是一種能形成芽孢的嚴格厭氧桿菌，破傷風是由破傷風梭狀芽孢桿菌（破傷風桿菌，Clostridium tetani）引起的感染性細菌性疾病。在厭氧條件下（如被污染的壞死性傷口），這種無所不在的桿菌可產生一種毒性極強的神經毒素 — 破傷風痙攣毒素。破傷風痙攣毒素可阻斷中樞神經系統中的抑制性神經遞質，引發肌肉強直和痙攣，亦即破傷風的典型表現。

破傷風的潛伏期通常為3~21天（中位數7天，范圍0~>60天）。在多數病例中，新生兒破傷風在出生后3~14天即可發病。在超過80%的病例中，破傷風表現為全身性強直性疾病。典型特征則早期表現為面部肌肉痙攣（牙關緊閉和痙笑），繼以背肌痙攣（角弓反張）和突發的全身性強直性癲癇（破傷風痙攣）。聲門痙攣可誘發猝死。在新生兒破傷風中，全身性痙攣出現前常表現為不能吮吸或接受喂食和過度哭鬧。破傷風的病死率在10%~70%之間，視治療措施、患者的年齡和總體健康而異。老年和嬰幼兒患者如不住院和接受加強治療，死亡率幾乎可達100%。在具備最佳醫療條件的醫院中，死亡率可降至10%~20%。

破傷風可在任何年齡發病，并且有明顯的季節性，其高峰出現在夏季中期或潮濕的季節，即便有了現代加強監護的條件，病例死亡率也非常高。絕大多數破傷風病例與生育相關，多發于發展中國家，主要見于不潔分娩和產后衛生條件較差的新生兒和孕產婦。兒童和成人受傷后發生破傷風也是一個嚴重的公共衛生問題。

實驗室檢測破傷風類毒素IgG抗體的方法主要有間接血凝試驗、毒素中和抗體實驗、酶聯免疫實驗（ELISA）等。

【檢驗原理】

試劑盒采用酶聯免疫間接法原理。

本試劑盒系用精制的破傷風類毒素抗原包被微孔板。樣品加入微孔后，其中抗破傷風類毒素抗體與微孔中固相化破傷風類毒素抗原形成抗原-抗體免疫復合物，洗滌去除未結合物，加入辣根過氧化酶標記小鼠抗人IgG單克隆抗體，與復合物反應形成抗原-抗體-酶標二抗復合物，洗滌去除未參與反應的酶結合物，加TMB底物顯色，呈色的深淺與破傷風類毒素IgG抗體的含量成正比。

【主要組成成份】

【儲存條件及有效期】

1. 于2~8℃冷藏、避光保存，禁止冷凍，有效期為12個月。

2. 未用完的預包被板應立即與干燥劑一起放入自封袋中密封，2~8℃環境中保存時間不得超過一周。

3. 未用完的其他組份試劑應立即將瓶蓋蓋好，置于2~8℃環境中保存，保存時間不得超過一周。

4. 產品的生產日期及有效期至詳見產品標簽。

【適用儀器】

含450nm波長的酶標儀或全自動酶免分析儀。

【樣本要求】

1. 人血清/血漿或全血均可用作測定樣本。抗凝劑（肝素、EDTA、檸檬酸鈉）對樣本檢測結果無干擾。

2. 血清/血漿樣品2～8℃冷藏保存可穩定4天，但建議在72小時內使用；全血樣本即采即用；若需長期保存，血清/血漿樣品可直接-20℃冷凍保存可穩定一年，全血樣本可用樣品稀釋液稀釋后吸出上清液，-20℃冷凍保存可穩定一年。凍存的樣本凍融次數建議不超過3次。

3. 應避免使用溶血、脂血樣本，不能使用被污染的樣本。

【檢驗方法】

1.樣品準備

1.1 先向1.5ml離心管中加入樣品稀釋液500μl。編號。

1.2 采集全血10μl，或吸取血清/血漿5μl，加入相應的離心管中，立即輕搖、混勻。

1.3 若為全血樣品，將離心管置室溫（或4℃冰箱）靜置，待紅血球全部沉降到孔底，取上清液檢測；若為血清或血漿樣品，混勻后即可使用。

2. 將試劑盒和樣品從冷藏環境中取出，放置30分鐘，平衡至室溫；恒溫箱或水浴鍋調節至37±1℃。

3. 配制洗滌液：1倍體積的濃縮洗滌液加入19倍體積的蒸餾水、純化水或去離子水，混勻。

4. 加樣：每次試驗設陽性對照1孔、陰性對照1孔，每孔加入相應的對照液100μl；設空白對照1孔，加樣品稀釋液100μl；其余每孔加入已稀釋的樣品（全血樣品取上清液）100μl。貼上封口膜，置37℃溫育60分鐘后，小心將封口膜揭掉，倒掉孔中的液體。每孔加300μl已稀釋好的洗滌液，輕微振搖10秒后倒掉，拍干。重復5次。有條件的可按上述洗滌條件設置參數，用洗板機洗滌。

5. 加抗人IgG抗體酶標記物：每孔100μl（空白孔不加）。貼上封口膜，置37℃溫育30分鐘后，小心將封口膜揭掉，倒掉孔中的液體。每孔加300μl已稀釋好的洗滌液，輕微振搖10秒后倒掉，拍干。重復5次。

6. 顯色：每孔加底物液A及底物液B各50μl，混勻。貼上封口膜，置37℃避光顯色15分鐘。

7. 測定：小心將封口膜揭掉，每孔加終止液50μl，混勻。30分鐘內用酶標儀雙波長450nm/630nm測定各孔OD值(使用單波長450nm時，必須以空白孔調零）。

【陽性判斷值】

1. 陰性對照OD₄₅₀＜0.3，陽性對照OD₄₅₀≥0.6，試驗成立。

2. Cut-Off 值 = 陰性對照OD₄₅₀值 × 2.1

S/CO值 =；

0.9≤S/CO值＜1.1，判為可疑，建議重復檢測；

S/CO值≥1.1，判為陽性；

S/CO值＜0.9，判為陰性。

【檢驗結果的解釋】

本試劑盒Cut-off值設定在破傷風類毒素IgG抗體完全保護滴度0.1IU/ml（原始樣品）。

1. 陽性結果：提示接種過含破傷風類毒素成分疫苗且已產生抗體，抗體水平不低于0.1IU/ml，達到完全保護滴度。

2. 陰性結果：提示未接種過含破傷風類毒素成分疫苗或含破傷風類毒素成分疫苗接種后產生的抗體水平低于0.1IU/ml，未達到完全保護滴度。

3. 可疑結果：對可疑結果建議重復檢測或兩周后再次檢測，動態觀察抗體水平的變化。

【檢驗方法的局限性】

僅用于人體內破傷風類毒素IgG抗體的定性檢測。