百日咳類毒素和絲狀血凝素IgG抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
產品標準編號：國械注準20153400525
產品說明：本產品用于體外定性檢測人血清/血漿或全血樣本中的百日咳類毒素和絲狀血凝素IgG抗體。
【產品名稱】
通用名稱：百日咳類毒素和絲狀血凝素IgG抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
【包裝規格】
96人份/盒
【預期用途】
本產品用于體外定性檢測人血清/血漿或全血樣本中的百日咳類毒素和絲狀血凝素IgG抗體。
適用于百日咳桿菌感染的輔助診斷以及人體內百日咳類毒素和絲狀血凝素IgG抗體的定性檢測。
百日咳是由革蘭氏陰性的百日咳桿菌引起的呼吸道傳染病，主要表現為遷延數周的咳嗽，以有吸氣性“尾聲”的劇烈陣發性痙咳為特征，嬰幼兒的臨床表現最為嚴重。
百日咳的病原體為百日咳鮑特菌，是一種小的、 營養需求苛刻的革蘭氏陰性球桿菌，專門附著在人呼吸道的粘膜層。有時，其他傳染源， 尤其是副百日咳鮑特菌，也可引起百日咳樣疾病。鮑特氏菌屬可因環境條件改變而發生表型變化，毒力因子的表達也可不同。這些因子包括百日咳毒素（PT）、絲狀血凝素 （FHA）、 百日咳粘著素 （PRN）、 菌毛 （FIM)2 型和 3 型、 腺苷酸環化酶毒素 （ACT)、氣管細胞毒素（TCT）、脂低聚糖和百日咳鮑特菌內毒素。雖然百日咳的發病機制尚不完全清楚，但 FHA、PRN 和菌毛可幫助細菌粘附在宿主細胞上，PT、TCT 和 ACT 可使細菌破壞上皮層，并躲避宿主的免疫系統。這些都是重要的致病因素。
百日咳的病原體僅在發病早期患者的鼻咽部可以檢出，經 9～10 天（范圍：6~20 天）的潛伏期，患者出現卡他癥狀（包括咳嗽）。1～2 周內，出現陣發性痙攣性咳嗽，并帶有特征性的雞鳴樣尾音。 典型表現是夜間咳嗽特別嚴重，咳后常伴有嘔吐。在嬰幼兒中，百日咳可引發呼吸暫停和發紺,但可無咳嗽；在青少年和成人中，非特異性的、經久不愈的咳嗽可能是惟一的臨床表現。疾病的卡他期、 陣發期和恢復期可持續數月。雖然大部分臨床上可辨別的百日咳病例發生在 1～5 歲的兒童，但報告的嚴重病例和死亡病例主要發生于出生后數周或數月。在大齡兒童、 青少年和成人中，由于其病程常常不典型，通常未被辨識為百日咳。
百日咳作為一種傳染病，每2～5年（平均3～4年）出現一次流行高峰。兒童廣泛接種疫苗和百日咳發病率的降低，并沒有影響到百日咳的流行周期。其沒有固定的季節流行模式，不同性別間存在一定差異，可發生在任何年齡。
實驗室檢測百日咳IgG抗體的方法主要有補體結合試驗、凝集試驗、毒素中和實驗、酶聯免疫實驗（ELISA）等。
【檢驗原理】
試劑盒采用酶聯免疫間接法原理。
本試劑盒系用純化的百日咳類毒素和絲狀血凝素混合抗原包被微孔板。樣品加入微孔后，其中抗百日咳類毒素或絲狀血凝素抗體與微孔中固相化百日咳類毒素和絲狀血凝素混合抗原形成抗原-抗體免疫復合物，洗滌去除未結合物，加入辣根過氧化酶標記小鼠抗人IgG單克隆抗體，與復合物反應形成抗原-抗體-酶標二抗復合物，洗滌去除未參與反應的酶結合物，加TMB底物顯色，呈色的深淺與百日咳類毒素和絲狀血凝素IgG抗體的含量成正比。
序號 |
組份名稱 |
規格與數量 |
組份主要成分 |
1 |
預包被板 |
12T×8 |
純化的百日咳類毒素和絲狀血凝素混合抗原 |
2 |
小鼠抗人IgG單克隆抗體酶標記物 |
10ml×1瓶 |
HRP酶標記的小鼠抗人IgG單克隆抗體，含穩定劑、生物防腐劑 |
3 |
濃縮洗滌液（20×） |
30ml×1瓶 |
20倍濃縮磷酸緩沖液，含NaCl、吐溫-20 |
4 |
樣品稀釋液 |
50ml×1瓶 |
檸檬酸鈉緩沖液、穩定劑等 |
5 |
陰性對照品 |
0.5ml×1瓶 |
滅活人源抗百日咳類毒素和絲狀血凝素IgG陰性血清，穩定劑 |
6 |
陽性對照品 |
0.5ml×1瓶 |
滅活人源抗百日咳類毒素和絲狀血凝素IgG陽性血清，穩定劑 |
7 |
底物液A |
5.0ml×1瓶 |
主要成分為過氧化脲 |
8 |
底物液B |
5.0ml×1瓶 |
主要成分為TMB |
9 |
終止液 |
5.0ml×1瓶 |
0.5M H2SO4溶液 |
10 |
自封袋 |
1份 |
―― |
11 |
封口膜 |
3張 |
―― |
我公司不同批號、不同品種試劑盒中的相同組分不得混用。不可與其他廠家試劑混用。
【儲存條件及有效期】
1. 于2~8℃冷藏、避光保存，禁止冷凍，有效期為12個月。
2. 未用完的預包被板應立即與干燥劑一起放入自封袋中密封，2~8℃環境中保存時間不得
超過一周。
3. 未用完的其他組份試劑應立即將瓶蓋蓋好， 置于2~8℃環境中保存，保存時間不得超
過一周。
4. 產品的生產日期及有效期至詳見產品標簽。
【適用儀器】
含450nm波長的酶標儀或全自動酶免分析儀。
【樣本要求】
1. 人血清/血漿或全血均可用作測定樣本。抗凝劑（肝素、EDTA、檸檬酸鈉）對樣本檢測結果無干擾。
2. 血清/血漿樣品2～8℃冷藏保存可穩定4天，但建議在72小時內使用；全血樣本即采即用；若需長期保存，血清/血漿樣品可直接-20℃冷凍保存可穩定一年，全血樣本可用樣品稀釋液稀釋后吸出上清液，-20℃冷凍保存可穩定一年。凍存的樣本凍融次數建議不超過3次。
3. 應避免使用溶血、脂血樣本，不能使用被污染的樣本。
【檢驗方法】
1.樣品準備
1.1 先向1.5ml離心管中加入樣品稀釋液500μl。編號。
1.2 采集全血10μl，或吸取血清/血漿5μl，加入相應的離心管中，立即輕搖、混勻。
1.3 若為全血樣品，將離心管置室溫（或4℃冰箱）靜置，待紅血球全部沉降到孔底，取上清液檢測；若為血清或血漿樣品，混勻后即可使用。
2. 將試劑盒和樣品從冷藏環境中取出，放置30分鐘，平衡至室溫；恒溫箱或水浴鍋調節至37±1℃。
3. 配制洗滌液：1倍體積的濃縮洗滌液加入19倍體積的蒸餾水、純化水或去離子水，混勻。
4. 加樣：每次試驗設陽性對照1孔、陰性對照1孔，每孔加入相應的對照液100μl；設空白對照1孔，加樣品稀釋液100μl；其余每孔加入已稀釋的樣品（全血樣品取上清液）100μl。貼上封口膜，置37℃溫育60分鐘后，小心將封口膜揭掉，倒掉孔中的液體。每孔加300μl已稀釋好的洗滌液，輕微振搖10秒后倒掉，拍干。重復5次。有條件的可按上述洗滌條件設置參數，用洗板機洗滌。
5. 加抗人IgG抗體酶標記物：每孔100μl（空白孔不加）。貼上封口膜，置37℃溫育30分鐘后，小心將封口膜揭掉，倒掉孔中的液體。每孔加300μl已稀釋好的洗滌液，輕微振搖10秒后倒掉，拍干。重復5次。
6. 顯色：每孔加底物液A及底物液B各50μl，混勻。貼上封口膜，置37℃避光顯色15分鐘。
7. 測定：小心將封口膜揭掉，每孔加終止液50μl，混勻。30分鐘內用酶標儀雙波長450nm/630nm測定各孔OD值(使用單波長450nm時，必須以空白孔調零）。
【陽性判斷值】
1. 陰性對照OD450＜0.3，陽性對照OD450≥0.6，試驗成立。
2. Cut-Off 值 = 陰性對照OD450值 × 2.1，S/CO值 =
0.9≤S/CO值＜1.1，判為可疑，建議重復檢測；
S/CO值≥1.1，判為陽性；
S/CO值＜0.9，判為陰性。
【檢驗結果的解釋】
1. 陽性結果：S/CO值≥1.1，表示樣本中百日咳類毒素和絲狀血凝素IgG抗體為陽性。
2. 陰性結果：S/CO值＜0.9，表示樣本中百日咳類毒素和絲狀血凝素IgG抗體為陰性。
3. 可疑結果：0.9≤S/CO值＜1.1，表示樣本中百日咳類毒素和絲狀血凝素IgG抗體為處于臨界值，建議重復檢測或兩周后再次檢測，動態觀察抗體水平的變化。
【檢驗方法的局限性】
僅用于人體內百日咳類毒素和絲狀血凝素IgG抗體的定性檢測。