白喉類毒素IgG抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
產品標準編號：國械注準20153400526
產品說明：本產品用于體外定性檢測人血清/血漿或全血樣本中的白喉類毒素IgG抗體。
【產品名稱】
通用名稱：白喉類毒素IgG抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
【包裝規格】
96人份/盒
【預期用途】
本產品用于體外定性檢測人血清/血漿或全血樣本中的白喉類毒素IgG抗體。
適用于白喉桿菌感染的輔助診斷、檢測正?；蛞赘腥巳嚎拱缀眍惗舅?/span>IgG抗體水平是否達到完全保護滴度（0.1IU/ml）以及接種含白喉類毒素成分疫苗后抗白喉類毒素IgG抗體水平是否達到免疫成功標準（0.1IU/ml）。
白喉是一種急性上呼吸道傳染病，由革蘭氏陽性白喉棒狀桿菌引起。細菌毒素可以引起產生上呼吸道阻塞性假膜或損傷心肌及其他組織，從而致病和致死。歷史上許多國家都發生過以兒童為主的白喉大流行。在白喉呈地方性流行的國家，該病多為散發病例或小規模爆發。盡管大多數的白喉桿菌感染為隱性或臨床癥狀相對較輕，但其病死率高（>10%），即便在最近的爆發中亦是如此。
白喉桿菌是細長、棒狀、革蘭氏陽性桿菌，有4個生物型（重型、belfanti、輕型、中間型）。除細菌外毒素外，細胞壁成份如O抗原和K抗原，在白喉的致病性中均具有重要作用。所有棒狀菌屬的熱穩定性O抗原都相同，而熱不穩定K抗原，則因菌株不同而有差異，因而可用于鑒別菌株。同時，K抗原對于粘膜吸附很重要，侵襲性是由索狀因子（毒性糖脂）介導的。白喉桿菌最重要的毒力因子是外毒素，外毒素是由噬菌體介導、細菌染色體編碼的高度保守性多肽。在宿主細胞外，外毒素的活性很低，但通過非毒性片段B粘附并進入細胞后，毒性片段A解離，通過抑制細胞蛋白合成殺死細胞。白喉外毒素可引起局部和全身細胞死亡。
多數情況下，白喉易感者感染后只引起一過性的咽部帶菌而不發病。由皮膚傷口污染可引起皮膚白喉，偶爾會引起呼吸道以外的粘膜感染。皮膚和粘膜損傷是重要的感染源，偶然會引起全身性病理反應。呼吸道白喉的癥狀一般在1～5天的潛伏期后出現，疾病發作較慢，以中度發熱和輕度的滲出性咽炎為特征。嚴重病例在喉部逐漸形成所謂的假膜，具有典型的不對稱的灰白色外觀并與深層組織緊密附著。假膜可擴展到鼻腔和喉頭，引起呼吸道阻塞。喉白喉有時可無咽部癥狀，是常常需實行氣管切開術的急癥。經粘膜（或皮膚）損傷處吸收的外毒素可引起心肌、腎臟以及神經系統等器官的毒性損傷。
對嚴重的局部疾病和全身性疾病的免疫主要依賴于抗毒素抗體 IgG，而對帶菌和輕型局部疾病的型特異性保護是誘生抗細胞壁變異性K抗原的抗體。細胞免疫也可能起保護作用。然而，有時感染不會誘導保護性免疫。循環抗毒素的水平在 0.01 IU/ml 以下時沒有保護， 在 0.01 IU/ml 時有部分保護，≥0.1 IU/ml 時有完全保護，1.0 IU/ml 的抗毒素水平與長期的保護性免疫相關?？苟舅啬軌蛲ㄟ^胎盤，新生兒出生后頭幾個月可獲得被動免疫。
目前檢測白喉類毒素特異性的IgG抗體的主要方法有：錫克氏試驗、細胞中和試驗、酶聯免疫法（ELISA）等。
【檢驗原理】
試劑盒采用酶聯免疫間接法原理。
本試劑盒系用精制白喉類毒素抗原包被微孔板。樣品加入微孔后，其中抗白喉類毒素抗體與微孔中固相化白喉類毒素抗原形成抗原-抗體免疫復合物，洗滌去除未結合物，加入辣根過氧化酶標記小鼠抗人IgG單克隆抗體，與復合物反應形成抗原-抗體-酶標二抗復合物，洗滌去除未參與反應的酶結合物，加TMB底物顯色，呈色的深淺與白喉類毒素IgG抗體的含量成正比。
序號 |
組份名稱 |
規格與數量 |
組份主要成分 |
1 |
預包被板 |
12T×8 |
白喉類毒素抗原 |
2 |
小鼠抗人IgG單克隆抗體酶標記物 |
10ml×1瓶 |
HRP酶標記的小鼠抗人IgG單克隆抗體，含穩定劑、生物防腐劑 |
3 |
濃縮洗滌液（20×） |
30ml×1瓶 |
20倍濃縮磷酸緩沖液，含NaCl、吐溫-20 |
4 |
樣品稀釋液 |
50ml×1瓶 |
檸檬酸鈉緩沖液、穩定劑等 |
5 |
陰性對照品 |
0.5ml×1瓶 |
滅活人源抗白喉類毒素IgG陰性血清，穩定劑 |
6 |
陽性對照品 |
0.5ml×1瓶 |
滅活人源抗白喉類毒素IgG陽性血清，穩定劑 |
7 |
底物液A |
5.0ml×1瓶 |
主要成分為過氧化脲 |
8 |
底物液B |
5.0ml×1瓶 |
主要成分為TMB |
9 |
終止液 |
5.0ml×1瓶 |
0.5M H2SO4溶液 |
10 |
自封袋 |
1份 |
―― |
11 |
封口膜 |
3張 |
―― |
我公司不同批號、不同品種試劑盒中的相同組分不得混用。不可與其他廠家試劑混用。
【儲存條件及有效期】
1. 于2~8℃冷藏、避光保存，禁止冷凍，有效期為12個月。
2. 未用完的預包被板應立即與干燥劑一起放入自封袋中密封，2~8℃環境中保存時間不得超過一周。
3. 未用完的其他組份試劑應立即將瓶蓋蓋好，置于2~8℃環境中保存，保存時間不得超過一周。
4. 產品的生產日期及有效期至詳見產品標簽。
【適用儀器】
含450nm波長的酶標儀或全自動酶免分析儀。
【樣本要求】
1. 人血清/血漿或全血均可用作測定樣本。抗凝劑（肝素、EDTA、檸檬酸鈉）對樣本檢測結果無干擾。
2. 血清/血漿樣品2～8℃冷藏保存可穩定4天，但建議在72小時內使用；全血樣本即采即用；若需長期保存，血清/血漿樣品可直接-20℃冷凍保存可穩定一年，全血樣本可用樣品稀釋液稀釋后吸出上清液，-20℃冷凍保存可穩定一年。凍存的樣本凍融次數建議不超過3次。
3. 應避免使用溶血、脂血樣本，不能使用被污染的樣本。
【檢驗方法】
1.樣品準備
1.1 先向1.5ml離心管中加入樣品稀釋液500μl。編號。
1.2 采集全血10μl，或吸取血清/血漿5μl，加入相應的離心管中，立即輕搖、混勻。
1.3 若為全血樣品，將離心管置室溫（或4℃冰箱）靜置，待紅血球全部沉降到孔底，取上清液檢測；若為血清或血漿樣品，混勻后即可使用。
2. 將試劑盒和樣品從冷藏環境中取出，放置30分鐘，平衡至室溫；恒溫箱或水浴鍋調節至37±1℃。
3. 配制洗滌液：1倍體積的濃縮洗滌液加入19倍體積的蒸餾水、純化水或去離子水，混勻。
4. 加樣：每次試驗設陽性對照1孔、陰性對照1孔，每孔加入相應的對照液100μl；設空白對照1孔，加樣品稀釋液100μl；其余每孔加入已稀釋的樣品（全血樣品取上清液）100μl。貼上封口膜，置37℃溫育60分鐘后，小心將封口膜揭掉，倒掉孔中的液體。每孔加300μl已稀釋好的洗滌液，輕微振搖10秒后倒掉，拍干。重復5次。有條件的可按上述洗滌條件設置參數，用洗板機洗滌。
5. 加抗人IgG抗體酶標記物：每孔100μl（空白孔不加）。貼上封口膜，置37℃溫育30分鐘后，小心將封口膜揭掉，倒掉孔中的液體。每孔加300μl已稀釋好的洗滌液，輕微振搖10秒后倒掉，拍干。重復5次。
6. 顯色：每孔加底物液A及底物液B各50μl，混勻。貼上封口膜，置37℃避光顯色15分鐘。
7. 測定：小心將封口膜揭掉，每孔加終止液50μl，混勻。30分鐘內用酶標儀雙波長450nm/630nm測定各孔OD值(使用單波長450nm時，必須以空白孔調零）。
【陽性判斷值】
1. 陰性對照OD450＜0.3，陽性對照OD450≥0.6，試驗成立。
2. Cut-Off 值 = 陰性對照OD450值 × 2.1，S/CO值 =
0.9≤S/CO值＜1.1，判為可疑，建議重復檢測；
S/CO值≥1.1，判為陽性；
S/CO值＜0.9，判為陰性。
【檢驗結果的解釋】
本試劑盒Cut-off值設定在白喉類毒素IgG抗體完全保護滴度0.1IU/ml（原始樣品）。
1. 陽性結果：提示白喉桿菌既往感染或接種過含白喉類毒素成分疫苗且已產生抗體，抗體水平不低于0.1IU/ml，達到完全保護滴度。
2. 陰性結果：提示體內白喉類毒素IgG抗體水平低于0.1IU/ml，未達到完全保護滴度。
3. 可疑結果：對可疑結果建議重復檢測或兩周后再次檢測，動態觀察抗體水平的變化。
【檢驗方法的局限性】
僅用于人體內白喉類毒素IgG抗體的定性檢測。